脂质体是一种利用天然材料磷脂和胆固醇制备的类似细胞膜的生物制品，具有良好的生物相容性和靶向性，能降低药物毒性。在药学领域脂质体作为类生物膜和药物载体被广泛用于实验研究［1］。利用脂质体包裹血红蛋白，具有可控制大小，同时脂质体可以屏蔽无基质血红蛋白的毒副作用，且延长血红蛋白的血浆半衰期，无红细胞表面的抗原决定簇，保存时间长达6个月等特点［2－4］。猪红细胞是来源广泛的血液代用品制备材料，经酶处理后的猪红细胞和血红蛋白可多次输给犬［5－6］，猪红细胞也用于兔的失血休克的抢救试验，证明猪红细胞对兔失血性休克有良好的急救作用［7］。猪源血红蛋白脂质体是制备动物通用红细胞的一个比较有前景的方法，可以克服动物血型多、产生的输血反应和同源输血导致动物疾病的传播等妨碍动物临床输血发展的难题。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 0.52kg健康猫1只，7.5kg杜长大三元健康仔猪1头。

1.1.2 药品与试剂 大豆卵磷脂，胆固醇，氯仿，无菌生理盐水，肝素。

1.1.3 仪器 BC－2008Vet血液分析仪，Uritest－150型尿液分析仪，超净工作台，离心机，显微镜，离心管，一次性使用无菌注射器。

1.2 方法

1.2.1 无菌采血 取健康猪血液，抗凝保存。

1.2.2 血红蛋白的分离及纯化 将无菌采取的新鲜猪血经胀破法［8］得到血红蛋白溶液。将得到的上清液依次通过5.0、1.2、0.22μm 微孔滤膜过滤，得到无基质猪血红蛋白。

1.2.3 脂质体包裹血红蛋白的制备 200mg大豆卵磷脂和100mg胆固醇充分溶于20mL氯仿中，再加入10mL提纯的浓度为133.3g／L的猪血红蛋白溶液，将混合溶液加入旋转蒸发仪中，转速为90 r／min，减压旋转蒸发加热，超声离心，分离和收集人工红细胞。

1.2.4 输注前体外配血试验 取20μL猪血红蛋白脂质体和40μL猫全血混合，室温放置15min，肉眼和显微镜下观察红细胞凝集程度，无凝集反应则可进行输血。

1.2.5 输血及猫的各项指标检查 输入5mL猪血红蛋白脂质体，观察输血前、中、后猫体温、心跳、精神状态以及检测输血前后血常规，尿常规。

2 结果

2.1 体外配血试验

红细胞无凝集反应和溶血反应。

2.2 输血前后猫临床指标变化

输血前正常。输血中和输血后猫精神沉郁，体温升高，心跳呼吸加快，可视黏膜颜色正常。

2.3 输血前后体温变化

从图1中可以看出输血后猫的体温变化不大，在第4天达到顶峰，随后恢复正常。

图1 猫输血前后体温变化Fig.1 The changes of temperature in cat before and after blood transfusion

2.4 输血前后脉搏的变化

在图2中输血后心跳逐渐升高，在第4天达到峰值，然后逐渐降低，在第6天左右逐渐恢复到输血前水平。

图2 猫输血前后心跳数变化Fig.2 The changes of number of heartbeats in cat before and after blood transfusion

2.5 输血前后血常规变化

在图3中猫红细胞在输血后会缓慢的增加。总体而言，红细胞数目的变化不明显。

图3 猫输血前后红细胞数目变化Fig.3 The changes of number of erythrocytes in cat before and after blood transfusion

在图4中猫白细胞数目在输血后第1天开始上升，在第2天后开始降低。在第4天逐渐恢复。

在图5中猫血红蛋白数目在输血后升高，然后逐渐回复到正常水平。

图4 猫输血前后白细胞数目含量变化Fig.4 The changes of number of white blood cells in cat before and after blood transfusion

图5 猫输血前后血红蛋白含量变化Fig.5 The changes of hemoglobin content in cat before and after blood transfusion

2.6 输血前后尿常规变化

从图6～图8中可以看出，胆红素、蛋白质、尿胆原含量变化趋势相似，在输血后均明显升高，在第5天到第6天后胆红素、尿胆原含量基本恢复正常值，并趋于稳定。其中尿蛋白在第2天达到最高后逐步下降，第5天恢复正常。

图6 猫输血前后胆红素含量变化Fig.6 The changes of bilirubin content in cat before and after blood transfusion

图7 猫输血前后尿蛋白含量变化Fig.7 The changes of protein content in cat before and after blood transfusion

图8 猫输血前后尿胆原含量变化Fig.8 The changes of urobilinogen content in cat before and after blood transfusion

3 讨论

血源的缺乏使得血液替代品一直是国际医学和生物技术等领域的研究热点，其中血液替代品也已经发展到类似于天然红细胞的结构和功能。脂质体包裹血红蛋白制剂与红细胞类的载氧血液替代品相比属于细胞型血红蛋白，表面不存在抗原，不会引起机体的排斥反应。因此，血红蛋白脂质体可以作为一种新的输血制剂用于贫血的治疗［9－12］。Terajima K等［13］的研究表明，通过检测血流动力学、血液平均动脉血压、中心静脉压，心脏指数值在液体休克复苏时脂质体包封血红蛋白可以保护微循环免受损伤。本试验中在猪血红蛋白脂质体输入受体猫体内后一段时间内，通过连续的监测血常规和尿常规的方法，结果猫在整个试验中没有发生输血反应，证明猪血红蛋白脂质体对猫是安全可用，目前国内外暂时还未见相关报道。